PCR儀的擴增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶問題解析

發(fā)布時間： 2020-10-23　　點擊次數(shù)： 3267次

　　PCR儀是利用DNA聚合酶用于擴增特定的DNA的片段，對特定基因做體外大量合成，可以將一段基因復制為原來的百億至千億倍。利用酶融合技術，梯度PCR儀可獲得更快、更好結果;其可靈活配備96和384孔加熱模塊并具優(yōu)異的梯度功能，用于加速實驗方案開發(fā)。7"高分辨率觸摸屏，配備智能向導，幫助您根據(jù)實驗室條件創(chuàng)建適合的PCR實驗方案。

　　PCR儀的擴增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶，這是怎么回事呢？

　　1.引物用量偏大，引物的特異性不高。應調換引物或降低引物的使用量。

　　2.循環(huán)的次數(shù)過多。適當增加模板的量，減少循環(huán)次數(shù)。

　　3.酶的用量偏高或酶的質量不好，應降低酶量或調換另一來源的酶。

　　4.退火溫度偏低，退火及延伸時間偏長。應提高退火溫度，減少變性與延伸時間，也可采用二種溫度的PCR擴增。以2度為梯度設計梯度PCR反應優(yōu)化退火溫度。

　　5.樣品處理不當。

　　6.Mg2+濃度偏高，因適當調整Mg2+使用濃度。

　　7.若為PCR試劑盒，也可能時試劑盒本身質量有問題。

　　8.復制提前終止。使用非熱啟動的聚合酶時常有發(fā)生。冰上準備反應體系或采用熱啟動聚合酶。

　　9.反應緩沖液未*融化或未充分混勻。確保反應緩沖液融化*并*混勻。

　　10.引物特異性差。檢查引物特異性或重新設計引物。

　　11.引物量過多。減少反應體系中引物的用量。

　　12.模板量過多。質粒DNA的用量應＜50ng，而基因組DNA則應＜200ng。

　　13.外源DNA污染。確保操作的潔凈。

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